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高效液相色谱法的原理是什么?

发布日期:2019-10-29 19:20

  1 .液 — 液分派色谱法(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体。流动相与固定相之间应互不相溶(极性分歧,避免固定液流失),有一个较着的分界面。当试样进入色谱柱,溶质在两相间进行分派。 LLPC与GPC有类似之处,即分手的挨次取决于K,K大的组分保存值大;但也有分歧之处,GPC中,流动相对K影响不大,LLPC流动相对K影响较大。

  1.高压:液相色谱法以液体为流动相(称为载液),液体流经色谱柱,遭到阻力较大,为了敏捷地通过色谱柱,必需对载液施加高压。正常可达150~350×105Pa。

  2. 高速:流动相在柱内的流速较典范色谱快得多,正常可达1~10ml/min。高效液相色谱法所需的阐发时间较之典范液相色谱法少得多,正常少于 1h 。

  高 效 液 相 色 谱 (high performance liquid chromatography Verhange HPLC)基于样品分子在固定相 (柱填料 )和流动相 (淋洗液 )之间的特殊彼此感化而实现样品的分手。 无须变性处置样品 ,可实现上样 、网络、在线阐发的主动化 。 常用于相对分子品质小于的卵白质、膜卵白及低品貌卵白质的分手 。 其有关的改良手艺包 括双向高效液相色谱 (2D-HPLC)、毛细管柱反相 高 效 液 相 色 谱reversed phase-HPLC ,RP-HPLC)等 ,与 2-DE 相 比 具 有 快 速 、 分辩率高的长处

  5. 顺应范畴宽:气相色谱法与高效液相色谱法的比力:气相色谱法虽拥有分手威力好,活络度高,阐发速率快,操作便利等长处,可是受手艺前提的制约,沸点太高的物质或热不变性差的物质都难于使用气相色谱法进行阐发。而高效液相色谱法,只需求试样能制成溶液,而不必要气化,因而不受试样挥发性的制约。对付高沸点、热不变性差、相对分子量大(大于 400 以上)的无机物(这些物质险些拥无机物总数的 75% ~ 80% )准绳上都可使用高效液相色谱法来进行分手、阐发。 据统计,在已知化合物中,能用气相色谱阐发的约占20%,而能用液相色谱阐发的约占70~80%。

  4.高活络度:高效液相色谱已普遍采用高活络度的检测器,进一步提高了阐发的活络度。如荧光检测器活络度可达10-11g。别的,用样量小,正常几个微升。

  高效液相色谱法是在典范色谱法的根本上,援用了气相色谱的理论,在手艺上,流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9107Pa);色谱柱是以特殊的方式用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于典范液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高活络度的检测器,可对流出物进行持续检测。

  二、性子及道理:高效液相色谱按其固定相的性子可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子互换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用分歧类型的高效液相色谱分手或阐发各类化合物的道理根基上与相对应的通俗液相层析的道理类似。其分歧之处是高效液相色谱活络、倏地、分辩率高、反复性好,且须在色谱仪中进行。

  c. 液 — 液分派色谱法的错误真理:虽然流动相与固定相的极性要求彻底分歧,但固定液在流动相中仍有微量消融;流动相通过色谱柱时的机器打击力,会形成固定液流失。上世纪70年代末成长的化学键合固定相(见后),可降服上述错误真理。此刻使用很普遍(70~80%)。

  IEC是以离子互换剂作为固定相。IEC是基于离子互换树脂上可电离的离子与流动相中拥有不异电荷的溶质离子进行可逆互换,根据这些离子以互换剂拥有分歧的亲和力而将它们分手。

  流动相为液体,固定相为吸附剂(如硅胶、氧化铝等)。这是按照物质吸附感化的分歧来进行分手的。其感化机制是:当试样进入色谱柱时,溶质分子 (X) 和溶剂分子(S)对吸附剂概况活性核心产生合作吸附(未进样时,所有的吸附剂活性核心吸附的是S),可暗示如下:

  式中:Xm--流动相中的溶质分子;Sa--固定相中的溶剂分子;Xa--固定相中的溶质分子;Sm--流动相中的溶剂分子。

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